維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)的操作步驟

產(chǎn)品簡介:

維生素 B2(Vitamin B2)又稱核黃素，是一種異咯嗪衍生物，耐熱、微溶于水，中性水溶液及乙醇溶液呈黃色，具有很強的熒光，在 pH 值 6~7 的溶液中熒光最強，在 pH=11時熒光消失，核黃素可被還原性物質(zhì)還原為無色的二氫化物，同時失去熒光;二氫化物在空氣中易重新氧化，恢復其熒光。維生素 B2檢測試劑盒(熒光光度法)是利用 Vitamin B2的中性溶液有強熒光當加入有還原性的亞硫酸鹽時，核黃素被還原為無熒光的物質(zhì)，根據(jù)稀核黃素溶液在還原前后熒光強度的變化即可定量檢測 Vitamin B2的含量，其激發(fā)波長為 440~500nm(多為460nm),發(fā)射波長為 510~550nm(多為 520nm)。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

自備材料

1、待測樣品如青菜、水果、牛奶、藥品等

2、蒸水、稀鹽酸或氫氧化鈉(0.1mol/L)

3、精密天平、今漿器、pH計或 pH試紙、離心機

4、離心管、維形瓶、容量瓶

5、高壓滅菌鍋或恒溫水浴鍋、熒光分光光度計

操作步驟(僅供參考):

1、稀釋組織勻漿液: 取適量的組織勻漿液(10x)，按組織漿液(10x): 蒸水=1:9 的比例稀釋，獲得 1x組織勻漿液，待用

2、樣品準備:

a)固體樣本:準確稱量 2~10g 樣品置于研磨器內(nèi)研磨，加入少量 1x組織漿液，研磨碎留取上清，再次用 1x組織勻漿液研磨，最后一并倒入 50ml維形瓶，加入1x組織勻漿液至40ml，充分搖勻，置于高壓滅菌鍋內(nèi)，121C下保持 30min，冷卻至室溫后用稀氫氧化鈉

調(diào) pH 值至 6.0~6.5，用1x組織漿液定容至 50ml; 如樣品雜質(zhì)較多，可在氧化鈉調(diào)至6.0 后立即用稀鹽酸再調(diào) pH 值至 4.5,4000g 離心 5min 或者過濾，上清液或濾液再調(diào) pH值至6.0~6.5，定容，濾液 4C保存?zhèn)溆谩?/font>b)液體樣品 : 牛奶、飲料等液體樣品，取 5ml牛奶于 50ml 形中，加入 1x組織勻漿液至 40ml，以下操作同上

3、稀釋標準品: 取適量的 Vitamin B,標準(100pg/ml)，按 Vitamin B,標準(100pg/ml):蒸水=1:9 稀釋成 Vitamin B,標準(10pg/m)4C保存注意 :Vitamin B,標準(100Pg/ml)需要充分溶解混勻，否則會導致標準值不準確。

制備亞硫酸鹽工作液 :取一支亞硫酸鹽 100mg 粉末，充分解于 2m 蒸水，即配制成 50mg/ml的亞硫酸鹽工作液，即配即用，冰水浴保存，4 小時內(nèi)有效，也可以用精密天平自行稱量落解。

5、Vitamin B,檢測 :選用恰當?shù)臑V色片，核黃素測定的激發(fā)波長為 460nm，發(fā)射波長為520nm，提前預熱儀器 30min，蒸水調(diào)零，以下表 6號管作參比洛液調(diào)熒光分光光度計的熒光強度讀數(shù)到滿刻度(100%) 分別測定其他標準洛液和樣品溶液的相對熒光強度，在測定中如果樣品溶液的熒光強度大于 100%，需要釋后再行測定測定加入亞硫酸鹽工作液前后的熒光值，分別記為 F。和F。加入亞硫酸鹽后，應立即混勻，并在 20s 內(nèi)測出各管熒光值

以各管 Vitamin B標準的濃度(ug/ml)或含量(ug)為橫坐標，以對應的校正后的熒光強度(F)為縱坐標，做出 Vitamin B標準曲線

根據(jù) Vitamin B標準曲線及樣品管的校正后的熒光強度(F)即可計算出待測樣品中Vitamin B,的實際濃度和含量。

100ml液體樣品中 Vitamin B含量(g/100ml= CxVx100N100g 固體樣品中 Vitamin B含量(g/100g)=CxV;x100/m

式中: C=待測樣品中 Vitamin B的濃度(g/ml)

V,=檢測體系中加入的濾液體積(ml)=5

V,=液體樣本濾液的總體積(ml)= 50

V;=固體樣品的上清液總體積(ml)= 50m=固體樣品的質(zhì)量(g)

注意事項:

1、 Vitamin B,見光易分解，在上述操作中，應嚴格避免陽光直射

組織勻漿液為酸性，有腐蝕性，應小心操作。2、

待測樣品如不能及時測定，應置于 2~8”C避光保存3 天內(nèi)穩(wěn)定3Vitamin B,在堿性溶液中不穩(wěn)定，因此在加稀氫氧化鈉調(diào) pH 值時應邊加邊搖，防止4.局部堿度過大，破壞 Vitamin B2。

樣品提取液中如有色素，會吸收部分熒光，需要使用高錳酸鉀氧化除去色素Vitamin B不易被中等氧化劑或還原破壞，但有 Fe2”存在時，可被過氧化氫破壞7含核黃素的標準品或樣品一旦加入亞硫酸鹽后會因產(chǎn)生二氫化物失去熒光，但二氫化物在空氣中又易重新氧化，恢復熒光，因此應在 10min 內(nèi)檢測完畢，而且越快越好.8、 如果樣品濃度過高，應用蒸餾水稀釋后重測，結(jié)果乘以稀釋倍數(shù)

有效期 :6 個月有效;4C運輸，4C保存.

 維生素B2檢測試劑盒(熒光光度法)的操作步驟