類(lèi)胡蘿卜素(Carotenoid)檢測(cè)試劑盒(微板法)的組成

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

葉綠體是光合作用的細(xì)胞器，在光合作用研究中，常需要用提取的葉綠體展開(kāi)下游研

究工作，葉綠體中所含的色素主要有兩大類(lèi)，葉綠素(包括葉綠素 a 和葉綠素 b)和類(lèi)胡蘿卜素(包括胡蘿卜素和葉黃素)，它們與類(lèi)囊體膜上的蛋白質(zhì)結(jié)合，成為色素蛋白復(fù)合體，其中葉綠素又稱(chēng)葉綠體色素(Chlorophyll)；類(lèi)胡蘿卜素是一種脂溶性且具有營(yíng)養(yǎng)特性的化合物，給植物和動(dòng)物提供天然色素，是重要的抗氧化劑，并有能力轉(zhuǎn)換為必需維生素，類(lèi)胡蘿卜素可預(yù)防細(xì)胞，組織和基因損毀，增強(qiáng)身體免疫系統(tǒng)，抵御感染，減少癌癥風(fēng)險(xiǎn)，保護(hù)心臟。類(lèi)胡蘿卜素(Carotenoid)檢測(cè)試劑盒(微板法)檢測(cè)原理是類(lèi)胡蘿卜素不溶解于水，而溶于有機(jī)溶劑，以有機(jī)溶劑粗提類(lèi)胡蘿卜素，根據(jù)朗伯-比爾定律，某有色溶液的吸光度(A)與其中溶質(zhì)濃度(C)和液層厚度(L)成正比，即 A=αCL，其中α為比例常數(shù)，當(dāng)溶液濃度以百分比濃度為單位，層液厚度為 1cm 時(shí)，α為該物質(zhì)的吸光系數(shù)。在本試劑盒情況下葉綠素 a、葉綠素 b、類(lèi)胡蘿卜素分別在 665nm、649nm、470nm 處有最大吸收波，根據(jù)經(jīng)驗(yàn)公式可計(jì)算出葉綠素 a、葉綠素 b、總?cè)~綠素、類(lèi)胡蘿卜素含量，主要用于植物組織中葉綠素、類(lèi)胡蘿卜素的提取以及以酶標(biāo)儀定量檢測(cè)葉綠素 a、葉綠素 b、總?cè)~綠素、類(lèi)胡蘿卜素含量。該試劑盒僅用于科研領(lǐng)域，不適用于臨床診斷或其他用途。

操作步驟(僅供參考)：

1、 類(lèi)胡蘿卜素提�。�

①取菠菜或其他植物新鮮葉片，洗凈，擦干，去中脈，稱(chēng)取剪碎的新鮮樣品 0.1g，置于

研缽或勻漿器，加入少量提取粉劑(約 50mg)和 1ml Carotenoid Assay Buffer，研磨或

勻漿成液態(tài)。

②將研磨液或勻漿液轉(zhuǎn)移至 10ml 離心管，用少量 Carotenoid Assay Buffer 沖洗研缽

或勻漿器數(shù)次，最后連殘?jiān)�一同倒�?/font> 10ml 離心管，補(bǔ)加 Carotenoid Assay Buffer 至

10ml，混勻，避光放置5min～2h。注：也可將組織剪碎，加入Carotenoid Assay Buffer，

避光放置 12~36h，期間晃動(dòng)數(shù)次，使組織與提取試劑充分接觸，當(dāng)組織接近白色，即

表示色素提取完成，如果仍有較多組織顏色，應(yīng)繼續(xù)浸提至組織殘?jiān)�顏色接近于白色�?/span>

2、濾紙或三層紗布過(guò)濾，留取濾液，也可采用 4000r/min 離心 5min，取上清液待測(cè)。

3、Carotenoid 測(cè)定：

①新鮮植物葉片或其他綠色植物組織(含葉綠體)類(lèi)胡蘿卜素含量測(cè)定：

酶標(biāo)儀開(kāi)機(jī)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)多波長(zhǎng)至 665nm、649nm 和 470nm；取類(lèi)胡蘿卜

素提取液 200μl 加入 96 孔板中，以 Carotenoid Assay Buffer 調(diào)零，分別用酶標(biāo)儀測(cè)

定提取液在 665nm、649nm、470nm 處的吸光度(A665、A649、A470)。

②黃色或其他非綠色植物組織(不含葉綠體)類(lèi)胡蘿卜素含量測(cè)定：

酶標(biāo)儀開(kāi)機(jī)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 440nm；取類(lèi)胡蘿卜素提取液 200μl 加入 96

孔板中，以 Carotenoid Assay Buffer 調(diào)零，用酶標(biāo)儀測(cè)定提取液在 440nm 處吸光度 (A440)。

計(jì)算：

1、新鮮植物葉片或其他綠色植物組織(含葉綠體)類(lèi)胡蘿卜素含量計(jì)算：

葉綠素 a 含量(mg/g)=Ca×V×N/(W×1000)

葉綠素 b 含量(mg/g)=Cb×V×N/(W×1000)

總?cè)~綠素含量(mg/g)=CT×V×N/(W×1000)

類(lèi)胡蘿卜素含量(mg/g)=CC×V×N/(W×1000)

式中：Ca=(13.95×A665-6.88×A649)/0.6=23.25×A665-11.467×A649 (mg/L)

Cb=(24.96×A649-7.32×A665)/0.6=41.6×A649-12.2×A665 (mg/L)

CT=(6.63×A665+18.08×A649)/0.6=11.05×A665+30.133×A649 (mg/L)

CC=(1000×A470/0.6 -2.05×Ca -114.8×Cb)/245(mg/L)

=(1000×A470 -2851.304×A649 +811.7385×A665)/147(mg/L)

=6.8×A470 -19.397×A649 +5.522×A665 (mg/L)

V=類(lèi)胡蘿卜素提取液體積(ml)=10(ml)

N=稀釋倍數(shù)

W=樣品鮮重或干重(g)

1000=ml 與 L 的單位換算

0.6=200μl 提取液在酶標(biāo)板中的光徑(cm)

2、黃色或其他非綠色植物組織(不含葉綠體)類(lèi)胡蘿卜素含量計(jì)算：

類(lèi)胡蘿卜素含量(mg/g)= A440/(250×0.6)×V×N×1000/W=0.067 ×A440×N/W

式中：V=類(lèi)胡蘿卜素提取液體積=0.01(L)

N=稀釋倍數(shù)

W=樣品鮮重或干重(g)

250=類(lèi)胡蘿卜素經(jīng)驗(yàn)消光系數(shù)(L/g/cm)

1000=g 與 mg 的單位換算

0.6=200μl 提取液在酶標(biāo)板中的光徑(cm)

注意事項(xiàng)：

1、 為避免葉綠素和類(lèi)胡蘿卜見(jiàn)光分解，操作時(shí)應(yīng)盡量避光，研磨或勻漿時(shí)應(yīng)盡量縮短時(shí)間。

2、 若不確定組織中有無(wú)葉綠素影響，可取提取液用分光光度計(jì)在波長(zhǎng) 600-700nnm 下進(jìn)行波長(zhǎng)掃描，若有波峰，則證明樣品中有葉綠素，反之則無(wú)。

3、 當(dāng)樣品吸光值大于 1 時(shí)，可適當(dāng)稀釋后再進(jìn)行測(cè)定，計(jì)算時(shí)乘以稀釋倍數(shù)。

4、 Carotenoid Assay Buffer 易揮發(fā)，不用時(shí)需擰緊瓶蓋。

5、 色素提取液不能出現(xiàn)渾濁現(xiàn)象，否則應(yīng)重新過(guò)濾。

6、 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

有效期：12 個(gè)月有效。

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