如何儲存酸性磷酸酶(ACP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)

產(chǎn)品簡介：

酸性磷酸酶(acid phosphatase，ACP)分布極廣泛，遍布各種組織，主要存在于細胞的溶酶體內(nèi)，所以常作為溶酶體標志酶。溶酶體外的酸性磷酸酶存在于內(nèi)質網(wǎng)和胞質內(nèi)，各種動物中的酸性磷酸酶各有不同，酸性磷酸酶的適宜 pH 為 4.5～5.5。酸性磷酸酶是一個蛋白家族，哺乳動物中其分子量從 18kD 到 100kD 不等，該酶分為兩類，一類為酒石酸鹽敏感型，一類為氟離子敏感型。溶酶體中的酸性磷酸酶為酒石酸鹽敏感型，而紅細胞和巨噬細胞中的酸性磷酸酶為氟離子敏感型。酸性磷酸酶(ACP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)(Acid Phosphatase Colorimetric Assay Kit)檢測原理是酸性磷酸酶(ACP)水解磷酸苯二鈉，產(chǎn)生酚和無機磷，經(jīng)堿處理后酚能與 4-AAP 反應，產(chǎn)物經(jīng)氧化生成紅色醌類化合物，紅色越多說明酸性磷酸酶活性越高，反之則酶活性越低，通過分光光度比色法測定 510nm 處吸光度，據(jù)此通過比色分析就可以計算出酸性磷酸酶活性水平。該試劑盒主要用于檢測血清中前列腺酸性磷酸酶活性，亦可用于檢測細胞或組織的裂解液或勻漿液、血漿、血清、尿液等樣品中內(nèi)源性的酸性磷酸酯酶活性。該試劑盒僅用于科研領域，不宜用于臨床診斷或其他用途。 

自備材料：

1、蒸餾水

2、離心管或試管

3、恒溫箱或水浴鍋

4、96 孔板

5、酶標儀

操作步驟(僅供參考)：

1、準備樣品：

①血漿、血清和尿液樣品：血漿、血清按照常規(guī)方法制備后可以直接用于本試劑盒的測定，尿液通常也可以直接用于測定，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測。

②細胞或組織樣品：取恰當細胞或組織裂解液，如果有必要可用 PBS 或生理鹽水進行適當勻漿，一般細胞數(shù)量在 106以上，組織應在 100mg 以上，3000~4000g 離心取上清，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測。

③植物樣品：取適量的植物組織加入少量生理鹽水或 PBS，充分搗碎或研磨，靜置 30min，用紗布或濾紙過濾，4000g 離心 20min，留取上清液并測量體積，-20℃凍存，用于酸性磷酸酶的檢測。

④高活性樣品：如果樣品中含有較高活性的酸性磷酸酶，可以使用原有的裂解液或 PBS 等進行稀釋，也可以采用 ACP Assay buffer 稀釋。

2、稀釋標準品：取適量的 Phenol(10mM)和蒸餾水，按下表稀釋成 0、0.1mM、0.2mM、0.3mM、0.4mM、0.5mM。

3、ACP 加樣：按照下表設置空白孔、標準孔、測定孔，溶液應按照順序依次加入，并注意避免產(chǎn)生氣泡。如果樣品中的酸性磷酸酯酶活性過高，可以減少樣品用量或適當稀釋后再進行測定，樣品的檢測最好能設置 2 平行孔，求平均值。

4、ACP 測定：輕輕混勻，室溫放置 10min，空白孔調(diào)零，酶標儀測定 510nm 處標準孔、測定孔的吸光度(記為 A 標準、A 測定)，一般 15min 內(nèi)檢測完畢。

計算：

ACP 活性單位的定義：在該實驗條件下，每分鐘每 ml酶液產(chǎn)生1nmol酚(nmol/ml·min)為一個活性單位。求平均值，以各標準孔吸光度為縱坐標，相應的酚含量即 ACP 活性(U/L)為橫坐標，繪制 ACP 活性單位吸光度值曲線，即為標準曲線。根據(jù)測得的各待測樣品的吸光度，于標準曲線上查出相應的 ACP 活性單位，乘以稀釋倍數(shù)后，換算為”nmol/ml·min”的活性單位。

組織或植物粗酶液獲得率(ml)=上清液體積(ml)/組織或植物質量×100%

注意事項：

1、 待測樣品中不能含有磷酸酶抑制劑，同時需避免反復凍融。

2、 建議每次測定時都做標準曲線，以使標準更準確，另外標準品需避免反復凍融。

3、 如果沒有酶標儀，也可以使用普通的分光光度計測定，但應注意比色杯的最小檢測體積。

4、 所測樣品的值高于標準曲線的上限，應用 ACP Assay buffer 稀釋樣品后重新測定。

5、 待測樣品中酸性磷酸酶活性較低時，可適當延長孵育時間至 30min。

6、 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。

有效期：6 個月有效。常溫運輸，4℃保存。

如何儲存酸性磷酸酶(ACP)檢測試劑盒(磷酸苯二鈉微板法)