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低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒的測定步驟
發(fā)布時間:2023/12/11 8:57:56 已瀏覽次數(shù): 97 次

 低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒的測定步驟

(直接法 分光光度計法)

一、試劑組成及配制:

 

二、測定步驟:

1、樣本處理:

①、血清(漿)直接測定,如超過線性范圍用生理鹽水稀

釋后測定。

②、培養(yǎng)液樣本:吸取培養(yǎng)液,1000 轉(zhuǎn)/分鐘,離心 10

分鐘,取上清測定。

[]:一般建議細胞密度在 100 萬個/mL 以上。

③、組織樣本:準確稱取組織重量,按重量(g):體積

(mL)=19 的比例,加入 9 倍體積的勻漿

介質(zhì),冰水浴條件下機械勻漿,2500 轉(zhuǎn)/

分,離心 10 分鐘,取上清液待測。

[]:1、如組織樣本為非高脂樣本,勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸

鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。

2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本,勻漿

介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進行提取。

④、細胞樣本:

A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出,1000 轉(zhuǎn)/

分,離心 10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;用

等滲緩沖液(推薦 0.1mol/L 、pH77.4 磷酸鹽

緩沖液)清洗 12 次,同樣 1000 轉(zhuǎn)/分,離心

10 分鐘,棄上清液,留細胞沉淀;

B、細胞破碎:加入 0.20.3mL 的勻漿介質(zhì)(推薦

0.1mol/L、pH77.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水)

進行勻漿,冰水浴條件下超聲破碎(功率:300W

35 /次,間隔 30 秒,重復 35 )或手動勻

漿,制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采

用裂解液裂解(推薦 TritonX-100,12%,裂解

3040 分鐘),裂解好的液體不離心直接測定。

[]:一般建議細胞密度在 100 萬個/mL 以上。破碎好的

液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎完全

低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒的測定步驟

 

 

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