低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒的測定步驟

（直接法 分光光度計法）

一、試劑組成及配制:

二、測定步驟：

1、樣本處理:

①、血清(漿)：直接測定，如超過線性范圍用生理鹽水稀

釋后測定。

②、培養(yǎng)液樣本：吸取培養(yǎng)液，1000 轉(zhuǎn)/分鐘，離心 10

分鐘，取上清測定。

[注]：一般建議細胞密度在 100 萬個/mL 以上。

③、組織樣本：準確稱取組織重量,按重量(g)：體積

(mL)=1：9 的比例，加入 9 倍體積的勻漿

介質(zhì)，冰水浴條件下機械勻漿，2500 轉(zhuǎn)/

分，離心 10 分鐘，取上清液待測。

[注]:1、如組織樣本為非高脂樣本，勻漿介質(zhì)統(tǒng)一用磷酸

鹽緩沖液(0.1mol/L pH 7.4)或生理鹽水進行提取。

2、如組織樣本為高脂樣本或部分為高脂樣本，勻漿

介質(zhì)可統(tǒng)一用無水乙醇進行提取。

④、細胞樣本：

A、細胞收集:將制備好的細胞懸液取出，1000 轉(zhuǎn)/

分，離心 10 分鐘，棄上清液，留細胞沉淀；用

等滲緩沖液（推薦 0.1mol/L 、pH7～7.4 磷酸鹽

緩沖液）清洗 1～2 次，同樣 1000 轉(zhuǎn)/分，離心

10 分鐘，棄上清液，留細胞沉淀；

B、細胞破碎:加入 0.2～0.3mL 的勻漿介質(zhì)（推薦

0.1mol/L、pH7～7.4 磷酸鹽緩沖液或生理鹽水）

進行勻漿，冰水浴條件下超聲破碎(功率：300W，

3～5 秒/次，間隔 30 秒，重復 3～5 次)或手動勻

漿，制備好的勻漿液不離心直接測定。也可采

用裂解液裂解(推薦 TritonX-100，1～2%，裂解

30～40 分鐘)，裂解好的液體不離心直接測定。

[注]：一般建議細胞密度在 100 萬個/mL 以上。破碎好的

液體可顯微鏡觀察細胞是否破碎完全

低密度脂蛋白膽固醇(LDL-C)測試盒的測定步驟