信帆生物:常見的ELISA試劑盒的兩種反應(yīng)方法
間接法
間接法常用於檢測抗體,一般之操作步驟為:間接法常用于檢測抗體,一般之操作步驟為:
- 將已知之抗原固著於塑膠孔盤上,完成後洗去多餘之抗原將已知之抗原固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余之抗原
- 加入待測檢體,檢體中若含有待測之一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入待測檢體,檢體中若含有待測之一次抗體,則其會與塑膠孔盤上的抗原進(jìn)行專一性鍵結(jié)
- 洗去多餘待測檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測之一次抗體鍵結(jié)洗去多余待測檢體,加入帶有酵素之二次抗體,與待測之一次抗體鍵結(jié)
- 洗去多餘未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,藉儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗原的含量。洗去多余未鍵結(jié)二次抗體,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,借儀器(ELISA reader)測定塑膠盤中的吸光值(OD值),以評估有色終產(chǎn)物的含量即可測量待測抗原的含量。
競爭法
競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,一般用於檢測小分子抗原,其操作步驟為:競爭法是一種較少用到的ELISA檢測機(jī)制,一般用于檢測小分子抗原,其操作步驟為:
- 將具有專一性之抗體固著於塑膠孔盤上,完成後洗去多餘抗體將具有專一性之抗體固著于塑膠孔盤上,完成后洗去多余抗體
- 加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)加入待測檢體,使檢體中的待測抗原與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié)
- 加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由於塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。加入帶有酵素之抗原,此抗原也可與塑膠孔盤上的抗體進(jìn)行專一性鍵結(jié),由于塑膠孔盤上固著的抗體數(shù)量有限,因此當(dāng)檢體中抗原的量越多,則帶有酵素之抗原可鍵結(jié)的固著抗體就越少,亦即,兩種抗原皆競相與塑膠孔盤上抗體鍵結(jié),即所謂競爭法之由來。
- 洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。洗去檢體與帶有酵素之抗原,加入酵素受質(zhì)使酵素呈色,當(dāng)檢體中抗原量越多,代表塑膠孔盤內(nèi)留下之帶有酵素的抗原越少,顯色也就越淺。
當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著於孔盤上時(shí),一般會考慮使用競爭法ELISA。當(dāng)需要偵測無法獲得兩種以上單一性抗體的抗原,或是不易得到足夠的純化抗體以固著于孔盤上時(shí),一般會考慮使用競爭法ELISA。
信帆生物:常見的ELISA試劑盒的兩種反應(yīng)方法