原位雜交實驗的注意事項
組織取材 。組織取材應(yīng)盡可能新鮮。
增強組織的通透性和核酸探針的穿透性 。去污劑處理：最常應(yīng)用的去污劑是Triton X-100，注意過度去污劑處理不僅影響組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)，而且還會引起靶核酸的丟失。蛋白酶處理：蛋白酶消化能使經(jīng)固定后被遮蔽的靶核酸暴露，以增加探針對靶核酸的可及性。
雜交緩沖液孵育 。雜交前用不含探針的雜交緩沖液在雜交溫度下孵育2h，以阻斷玻片和標(biāo)本中可能與探針產(chǎn)生非特異性結(jié)合的位點，達(dá)到減低背景的目的。
防止污染 。在整個雜交前處理過程中都需要戴消毒手套，實驗所用玻璃器皿及鑷子都應(yīng)于實驗前一日置高溫烘烤（180℃）以達(dá)到消除RNA酶的目的。雜交前及雜交時所用的溶液均需經(jīng)高壓消毒處理。
雙鏈DNA探針和靶DNA的變性 。雜交反應(yīng)進(jìn)行時，探針和靶核酸都必須是單鏈的。
原位雜交實驗的注意事項
