免疫印跡WB實驗的小技巧

蛋白質(zhì)免疫印跡法 (Western Blot ) ，簡稱WB ，是指通過SDS-PAGE膠將不同分子量的蛋白質(zhì)分離開，然后將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)移到載體(PVDF)膜上，利用抗原抗體的特異性結(jié)合，用特異性的一抗結(jié)合目標(biāo)蛋白，用HRP標(biāo)記的二抗結(jié)合一抗，再加以ECL發(fā)光液顯色，檢測組織或者細(xì)胞內(nèi)某種或者某些特異性蛋白質(zhì)的表達(dá)。蛋白質(zhì)免疫印跡是做蛋白質(zhì)分析的一種常規(guī)技術(shù)，常用于鑒定某種蛋白，并能對蛋白進(jìn)行定性和半定量分析，還可以用于蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)、蛋白質(zhì)-DNA、蛋白質(zhì)-RNA相互作用后續(xù)分析。　

蛋白提取是做WB的必要提取步驟。主要是將組織或細(xì)胞的蛋白分離提取出來，以便后續(xù)做WB檢測。蛋白提取主要可以提�。嚎偟鞍�、胞漿/胞核蛋白、線粒體蛋白、膜蛋白�？捡R斯亮藍(lán)染色 (coomassie blue staining) ，簡稱考染 ，是以考馬斯亮藍(lán)R250為染料，用于SDS-PAGE或非變性PAGE等蛋白電泳凝膠的常規(guī)染色和脫色，或Western轉(zhuǎn)膜后PAGE膠上殘余蛋白的檢測

實驗流程：

蛋白提取-制膠-電泳-轉(zhuǎn)膜-封閉-一抗孵育-二抗孵育-化學(xué)發(fā)光-結(jié)果分析;

送樣運(yùn)輸要求：

新鮮組織，100mg以上，干冰運(yùn)輸。

細(xì)胞量為5*10^6以上，收集細(xì)胞沉淀，干冰運(yùn)輸。