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外周血淋巴細(xì)胞分離的原理
發(fā)布時(shí)間:2023/8/1 13:35:13 已瀏覽次數(shù): 105 次

 外周血淋巴細(xì)胞分離的原理

人外周血淋巴細(xì)胞主要是指體內(nèi)的淋巴細(xì)胞,主要包括T細(xì)胞和B細(xì)胞。外周血淋巴細(xì)胞能夠幫助人體抵御外來(lái)的細(xì)菌和病毒,能夠起到良好的免疫作用。人外周血淋巴細(xì)胞分離液(FICOLL配制)是一種用于分離人外周血淋巴細(xì)胞的無(wú)菌、低內(nèi)毒素水平的密度梯度分離液。

產(chǎn)品名稱:人外周血淋巴細(xì)胞分離液(FICOLL配制)

產(chǎn)品規(guī)格:200ml

儲(chǔ)存條件:室溫,避光

產(chǎn)品指標(biāo):

密度            1.077±0.001g/mL

滲透壓        290~350mOsm/kgH2O

無(wú)菌           0.1μm 濾膜過(guò)濾

原理:根據(jù)血細(xì) 胞的密度差異(紅細(xì)胞和粒細(xì)胞密度為1.090g/mL左右;淋巴細(xì)胞和單核細(xì)胞密度為1.075~1.090g/mL;血小板為 1.030~1.035g/mL),通過(guò)離心使一定密度的細(xì)胞按相應(yīng)密度梯度分布,從而將淋巴細(xì)胞從人外周血或臍帶血中分離出來(lái)。

實(shí)驗(yàn)步驟(僅供參考)

1. 取新鮮抗凝全血(EDTA、枸櫞酸鈉或肝素抗凝均可)或者去纖維蛋白血液,用等體積的全血及組織稀釋液 或者PBS稀釋全血。

2. 在離心管中加入適量分離液,將稀釋后的血液平鋪到分離液液面上方,注意保持兩液面界面清晰。

3. 室溫,水平轉(zhuǎn)子500~1000g,離心20~30min (血液的體積越大所需的離心力越大,離心 時(shí)間越長(zhǎng),佳的分離條件需摸索,離心轉(zhuǎn) 速大不超過(guò)1200g)。

4. 離心后將出現(xiàn)明顯的分層:上層是稀釋的 血漿層,中間是透明的分離液層,血漿與分 離液之間的白膜層即為淋巴細(xì)胞層,離心管 底部是紅細(xì)胞與粒細(xì)胞。

5. 小心的吸取白膜層細(xì)胞到15mL潔凈的離心 管中, 10mL PBS或細(xì)胞洗滌液洗滌白膜層 細(xì)胞。250g,離心10min。

6. 棄上清,5mLPBS或細(xì)胞清洗液重懸細(xì)胞,250g,離心10min。

7. 重復(fù)上一步驟棄上清,細(xì)胞重懸備用

注意事項(xiàng):

1、本產(chǎn)品僅供科研實(shí)驗(yàn)用,不做其它用途。

2、本裂解液為無(wú)菌產(chǎn)品,分離細(xì)胞用于細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)請(qǐng)注意無(wú)菌操作。

3、為了您的安全與健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。

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