講解ELISA試劑盒的正確操作步驟-讓你看完豁然開(kāi)朗

 信帆生物提供高靈敏度，特異性好，即用型的ELISA試劑盒，長(zhǎng)期與全國(guó)各大高校合作，引用文獻(xiàn)上千篇。

ELISA試劑盒包含預(yù)包被酶標(biāo)板、檢測(cè)抗體、鏈酶親和素標(biāo)記的HRP、標(biāo)準(zhǔn)品、TMB顯色液、終止液、洗液、封板膜、檢測(cè)緩沖液等10個(gè)成分。

ELISA在操作前試劑和組分都先恢復(fù)到室溫，標(biāo)準(zhǔn)品、質(zhì)控品和樣品，建議做復(fù)孔。ELISA緩沖液配制
吸取5毫升10x Assay Buffer緩沖液，至50ml離心管，吸取50ml20x洗液至1升量筒，加蒸餾水至1000毫升。
加樣注意事項(xiàng)：
取出已恢復(fù)至室溫的酶標(biāo)板，加入300微升洗液，以洗去包被抗體保護(hù)劑，使包被抗體處于最佳活性狀態(tài)，靜置浸泡30秒。洗板結(jié)束后，立即使用酶標(biāo)板，不要讓酶標(biāo)板干燥。
排版布局H1、H2孔為空白孔，A1、A1至G1、G2為標(biāo)準(zhǔn)曲線的S1至S7孔，每孔加入50微升的Assay Buffer，根據(jù)排版，每孔加入50微升標(biāo)準(zhǔn)品和樣本，加樣時(shí)，垂直懸空加入液體，加完后槍頭輕輕碰液面（建議標(biāo)準(zhǔn)品，樣本都做復(fù)孔），最后每孔加入50微升檢測(cè)抗體，加完后用封板膜小心封好酶標(biāo)板，為讓抗原抗體充分接觸。

洗滌注意事項(xiàng)：

洗滌在ELISA過(guò)程中雖不是一個(gè)反應(yīng)步驟，但卻決定著實(shí)驗(yàn)的成敗。ELSIA就是靠洗滌來(lái)達(dá)到分離游離的和結(jié)合的酶標(biāo)記物的目的。通過(guò)洗滌以清除殘留在板孔中沒(méi)能與固相抗原或抗體結(jié)合的物質(zhì)，以及在反應(yīng)過(guò)程中非特異性地吸附于固相載體的干擾物質(zhì)。聚苯乙烯等塑料對(duì)蛋白質(zhì)的吸附是普遍性的，而在洗滌時(shí)應(yīng)把這種非特異性吸附的干擾物質(zhì)洗滌下來(lái)。可以說(shuō)在ELISA 操作中，洗滌是主要的關(guān)鍵技術(shù)，應(yīng)引起操作者的高度重視，操作者應(yīng)嚴(yán)格按要求洗滌，不得馬虎。

計(jì)算方法：

檢測(cè)完成后，以標(biāo)準(zhǔn)品濃度做為縱坐標(biāo)，對(duì)應(yīng)的吸光度（OD值）作為橫坐標(biāo)，利用計(jì)算機(jī)軟件，采用四參數(shù)Logistic曲線擬合（4-pl），創(chuàng)建標(biāo)準(zhǔn)曲線方程，通過(guò)樣本的吸光度（OD值），利用方程計(jì)算樣品的濃度值。如果樣品被稀釋?zhuān)ㄟ^(guò)上述方法測(cè)的的濃度值，要乘以稀釋倍數(shù)，才是樣品的終濃度。

抄筆記總結(jié)：

1.  從室溫平衡60min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2.  設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL；

3.  待測(cè)樣本孔先加待測(cè)樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4.  隨后標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔中每孔加入辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測(cè)抗體100μL，用封板膜封住反應(yīng)孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿(mǎn)洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板5次（也可用洗板機(jī)洗板）。

6.  每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7.  每孔加入終止液50μL，15min內(nèi)，在450nm波長(zhǎng)處測(cè)定各孔的OD值。

信帆生物是專(zhuān)業(yè)的ELISA試劑盒供應(yīng)商，提供大鼠ELISA試劑盒，小鼠ELISA試劑盒，人ELISA試劑盒等等，產(chǎn)品質(zhì)量穩(wěn)定，庫(kù)存充足，價(jià)格實(shí)惠，深受廣大科研用戶(hù)青睞。

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